Construção e expressão de anticorpo humanizado a partirdo anticorpo monoclonal contra proteína de 70 kDa de Sporotrix schenckii (P6E7) / Construction and expression of humanized antibody from the monoclonal antibody against the protein of 70 kDa Sporotrix schenckii (P6E7)

Sporothrix shenckii é o agente etiológico da esporotricose, micose de carater crônico e de ampla distribuição mundial. No Brasil, vem crescendo o número de casos da doença, bem como a incidência de formas clínicas graves ou atípicas. Nosso grupo de pesquisa desenvolveu um anticorpo monoclonal contra o componente antigênico proteíco de 70 kDa, secretado pelas células leveduriformes de S. schenckii, denominado anticorpo monoclonal (AcMo) P6E7. Este AcMo apresentou atividade profilática e terapêutica na esporotricose experimental, no entanto, este anticorpo possui origem murina, o que pode gerar uma resposta imunogênica quando administrado em humanos, impossibilitando sua utilização por tempo prolongado. Visando sua possível utilização no tratamento da esporotricose humana, a nossa proposta foi a humanização do AcMo P6E7 na forma de FvFc (Fv-linker- Fc) através de engenharia genética. Inicialmente construimos duas versões uma humanizada e outra quimérica do AcMo contra a fração de 70 kDa do antigeno de S. schenckii. Os anticorpos foram expressos em vetores de expressão dicistrônicos e produzidos com eficiência e estabilidade estrutural em células de mamíferos da linhagem CHO. Posteriormente, esses anticorpos foram purificados por cromatografia de afinidade e analisados quanto a sua capacidade de ligação ao fungo e função efetora. Verificamos que os FvFcs construídos foram capazes de se ligar a porção de 70 kDa do antígeno de S. schenckii. Através de ensaios de fagocitose, constatamos que os fragmentos FvFc do P6E7 humanizado e quimérico foram capazes de opsonizar as leveduras de S. schenckii aumentando, assim, o índice fagocítico em macrófagos humanos. Esses dados em conjunto, sugerem a possível utilização do anticorpo construído no tratamento da esporotricose humana

Sporothrix shenckii is the etiological agent of sporotrichosis, a chronical fungal infection that shows a worldwide distribution. In Brazil, there is a growing number of cases of sporotrichosis, as well as the incidence of severe or atypical clinical forms. Our research group developed a monoclonal antibody (mAb) against the fungal antigenic component a protein of 70 kDa, secreted by S. schenckii yeasts called P6E7. This mAb showed prophylactic and therapeutic activity in experimental sporotrichosis, however, this antibody has murine origin, which can generate an immune response when administered to humans, precluding their use for prolonged time. For its possible use in the treatment of human sporotrichosis, our proposal is the humanization of mAb P6E7 through genetic engineering. Initially, we built two versions of the original antibody: an humanized version and a chimeric antibody both against the 70 kDa fraction from S. schenckii antigen. The antibodies were expressed in dicistronic expression vectors and were efficiently produced in mammalian cells CHO strain, showing good structural stability. Subsequently, these antibodies were purified by affinity chromatography and assayed for their binding ability to the fungus and effector function. We found that the built os FvFcs (Fv-linker- Fc) fragments were capable of binding to the 70 kDa portion of S.schenckii antigen. Through phagocytosis assays, we found that the FvFc fragments from the humanized and chimeric P6E7 were able to opsonize S. schenckii yeasts, thus increasing the phagocytic index in human macrophages. Together, These data suggest the potential use of the antibodies constructed in the treatment of human sporotrichosis

Anticuerpos, antifosfolípidos: frecuencia en preeclampsia y otros estados hipertensivos del embarazo / Antibodies and antiphopholipid in patients with preeclampsia and pregnancy associated hypertension of other states

Conocer la presencia de anticuerpos antifosfolípidos en las pacientes con preeclampsia y otros estados hipertensivos del embarazo. Se realizó un estudio descriptivo, retrospectivo, del tipo caso-control, la muestra fue 30 pacientes con preeclampsia (grupo estudio), 10 embarazadas con hipertensión arterial (HTA) esencial sin preeclampsia, 10 embarazadas sanas, 10 nulíparas en edad reproductora. Se determinó en cada grupo anticuerpos anticardiolipinas (ACA: IgM e IgG); tiempo parcial de tromboplastina (PTT) y PTT corregido; VDRL, anticuerpos antinucleares. Se realizó evaluación prenatal y perinatal de la madre y su producto. Cinco pacientes (16,66 por ciento) con preeclampsia tuvieron títulos elevados de ACA (IgM) (p=0.3173). Una paciente (3.33 por ciento) presentó anticoagulante lúpico (LA) positivo. Dos pacientes (20 por ciento) con HTA crónica resultaron ACA positivo, de quienes una presentó título elevado del IgM e IgG (p=1.0000). Tres (30 por ciento) embarazadas sanas tuvieron ACA positivo (IgM). Una paciente (10 por ciento) nulípara resultó ACA positivo (IgM). Todas en estos tres grupos resultaron LA negativo. La correlación entre los diferentes grupos con la presencia de ACA no fue estadísticamente significativa (p=0.5891). Los títulos elevados de ACA (IgM) no son un factor de riesgo importante con relación a la preeclampsia y otros hipertensivos del embarazo. En nuestro estudio el azar jugó un papel importante en los resultados del mismo, no demostrándose la presencia de ACA en la preeclampsia y sus complicaciones

Interferon in viral liver diseases: pharmalogical aspects

Descreveram-se os principais tipos de Interferon (IFN) fundamentais. Os IFN alfa, beta e gama foram comparados quanto a origem de açäo. Os principais tópicos analisados foram: receptores, vias metabolicas, proteinas induzidas pelo IFN, efeitos imunes, anticorpos anti-interferon e outros efeitos. Efeitos colaterais e farmacocinetica do IFN foram também analisados

Estudio comparativo de las técnicas de Machado Guerreiro y Elisa en el diagnóstico de infección chagásica / Compartive assay of Machado Guerreiro and Elisa techniques in diagnosis of chagas disease

Se procesaron 241 muestras de donantes voluntarios del banco de Sangre del Estado Zulia de sexo masculino y femenino, en edades comprendidas entre 18 y 30 años; a cada una de las cuales se le practicaron las pruebas de Elisa realizadas en el IVIC utilizando cepas puras del antígeno de T.cruzi, ELISA utilizando un kit comercial y Machado Guerreiro. Ambas técnicas realizadas en el Banco de Sangre del Estado Zulia. De los resultados obtenidos, con la técnica de Machado Guerreiro, 7 sueros resultaron positivos y 234 negativos, con ELISA (Banco de Sangre) 21 positivos y 220 negativos; con ELISA (IVIC) 32 positivos y 209 negativos. La comparación de Machado Guerreiro con ambas ELISA empleando el método de análisis Ji-Cuadrado modificado por Brand-Snedecor, reveló que las diferencias observadas entre los resultados de las técnicas fueron significativas. Evaluando los resultados ELISA (Banco de Sangre) y ELISA (IVIC) se demostró que no hubo diferencias significativas entre ambas pruebas. Los resultados de este estudio demostraron que ELISA es más sensible que Machado Guerreiro ya que detectó cantidades mínimas de anticuerpos específicos para antígenos chagásicos que no fueron detectados por Machado Guerreiro. El uso de la técnica ELISA amplía el rango de seguridad para las transfunsiones sanguíneas en relación a pacientes con infección chagásica

Purificación de anticuerpos policlonales a la enterotoxina estafilocóccica C por cromatografía de afinidad / Purification of policlonals antibodies a the staphylococcal C enterotoxins by affinity chromatography

Se describe un método para la purificación de anticuerpos policlonales, con el objetivo de utilizarlos en la detección de enterotoxinas estafilocóccicas en los alimentos. Se seleccionó la técnica de Cromatografía de Afinidad empleando como inmunoadsorbente la toxina C ligada a Sepharosa 4B activada con Bromuro de Cianógeno. El procedimiento permite la purificación en un paso, donde se obtuvo un alto rendimiento (97 por ciento de la IgG fijada), rapidez y eficiencia

Autoanticuerpos en niños con enfermedades del tejido conjuntivo / Auto antibodies in children with connective tissue disease

El diagnóstico y clasificación de las enfermedades del tejido conjuntivo en los niños se ha basado principalmente en datos clínicos. Sin embargo, la adición de un número importante de hallazgos inmunológicos puede sustentar que en la infancia se presentan diferentes tipos y subgrupos de enfermedades autoinmunes. Los autoanticuerpos con diferentes especificidades definen no solo a distintos padecimientos sino también a diferentes subgrupos de pacientes con enfermedades del tejido conjuntivo. Esta revisión enfatiza que el factor reumatoide y los anticuerpos antinucleares son pruebas útiles que pueden ayudar a definir las características clínicas en niños con padecimientos reumáticos. El factor reumatoide de la clase IgM está presente frecuentemente en el grupo de pacientes con artritis reumatoide poliarticular, mientras que el grupo oligoarticular con uveitis tiene por características presentar una alta prevalencia de anticuerpos antinucleares. Los anticuerpos anti-DNA y anti-Sm son positivos en niños con lupus eritematoso generalizado. Los pacientes con dermatomiositis infantil tienen una menor frecuencia de anticuerpos contra los antígenos Jo-1 y PM-1, al compararlos con el grupo de polidermatomiositis del adulto. Los niños con esclerosis sistémica y síndome de CREST pueden mostrar anticuerpos anti-Scl-70 (topoisomerasa-1) y anticuerpos anti-centrómeto. Los títulos elevados de los anticuerpos anti RNpn (U1) parecen definir no sólo a la enfermedad mixta del tejido conjuntivo del adulto sino también a los niños. Los anticuerpos anti-SS-A (Ro) y anti-SS-B (La) han sido encontrados en pacientes con síndrome de Sjögren primario. Interesante otras anomalías, incluyendo a los anticuerpos antifosfolípidos, anti-proteínas hsp-70 y hsp-90, así como los anticuerpos contra productos contra oncogene-c-myc que han sido reportados en pacientes adultos con diferentes padecimietos del tejido conjuntivo, no han sido estudiados completamente en las enfermedades autoinmunes del niño. En suma los autoanticuerpos constituyen marcadores importantes que pueden ayudar a comprender lo complejo de la autoinmunidad en los niños.

Auto anti M.N.P1 en un donante de sangre sin evidencia de estímulo antigénico / Auto anti M.N. P1 in blood donor without evidence of antigenic stimuli

Se presenta un caso de un donante voluntario de sangre, no embarazada y no transfundida, mestiza. Los estudios inmunohematológicos revelan la presencia de anticuerpos del tipo Anti M Anti N y Anti P1. Se describen las propiedades fisico-químicas de dichos anticuerpos y se señalan los probables riesgos que este tipo de personas pueden presentar, como donante o como receptor de sangre